HPLC高效液相色谱仪原理

高效液相色谱仪的原理是什么？今天铄思百检测小编带大家详细了解一下！

一、HPLC高效液相色谱仪的原理

高效液相色谱仪也叫高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱等，它是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。

色谱法的分离原理是:溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

高效液相色谱法的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20%，而80%则需用高效液相色谱来分析。

由于HPLC分析不受温度和样品沸点限制，因此具有更广阔的应用潜力。经过30多年的迅速发展，高效液相色谱法在基础理论、仪器装置和色谱柱等方面的研究已趋于成熟，现已成为化学化工、环境、药学、食品等多个领域中最具优势的分离分析方法之一。

液相色谱根据分离机理的不同可分为:

• 液固吸附色谱

• 液液分配色谱

• 离子交换色谱

• 离子对色谱法

• 分子排阻色谱(或凝胶渗透色谱)

二、HPLC高效液相色谱仪结构组成

三、高效液相色谱仪常见问题

1. HPLC如何定量？

答∶HPLC定量时，最常使用外标法（定量原理：峰面积或者峰高随浓度的变化而相应变化）。若使用其他定量方式，请提前沟通。若使用外标法，除填写对接单外，您需要在对接单中额外补充：

A、目标物质的标品-做外标；

B、目标物质的浓度范围-决定外标定量范围。

2. HPLC如何定性？

答∶HPLC定性时，是以保留时间定性。此步骤也需要您提供标准品，通过比对标准品与待测物质的保留时间来定性。如果您样品成分复杂，存在待测物质的出峰情况受样品中其他物质的干扰的可能性，就算保留时间能与标准品对应上，但不能确认样品中含有该标准品物质。所以HPLC用于定性时目标物质纯度应该较高。

3. 目标物质含量较低，可能测不出怎么办？

可以进行浓缩的预处理，因为一般天然样往往含量较低，低于检出限，但是富集之后可以在检出限内进行定量）。缺点是需要确认合适的预处理步骤。

具体的浓缩的预处理过程务必由客户提供，因为不同目标物质浓缩步骤往往有所区别，根据目标物选择合适的浓缩步骤，对检测结果的准确性有着至关重要的作用。

4. 仪器的检出限是多少？

答∶正如毒理学中“抛开剂量谈毒性”的含义，HPLC检出限也并不是一个准确值。

检出限的定义为：某特定分析方法在给定的置信度内可从样品中检出待测物质的最小浓度或最小量。即，抛去其他细节因素，主要影响HPLC检出限的是测试方法以及对应测试物质。

举例：假如客户A的样品是液体样，需要检测其中四环素的含量。那么我们需要先按照测试方法设置好仪器，然后进标样，直到可以判定标品中存有浓度明显高于空白（大多是3倍噪声）的四环素出峰，这一标样浓度可以称为检出限。

如果在自身样品各种信息都没有提供的前提下，直接问仪器检出限是多少？就说明欠缺对检出限定义、HPLC基础原理的理解。

5. HPLC和LCMS最显著的区别？

答∶液相色谱可以后搭多种检测器，如紫外检测器，荧光检测器、蒸发光检测器、质谱检测器等。搭配质谱检测器的这类成为LCMS。两者本身的重点就有所偏重。前面几种检测器，在判定物质时，更依赖于标品定性，一般是默认一个峰为一个物质，因此对分峰要求较为严格；而LCMS由于其质谱检测器的灵敏性，重点在于碎片的区分。即使LCMS上显示是一个峰，也可以根据质谱数据判定前半个峰、后半个峰、甚至峰顶是否是同一个物质。所以属于两种检测手段，两者数据不具有对比性。

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